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饲料中维生素A的液相(HPLC)检测方案 

饲料中维生素A的液相(HPLC)检测方案 

近期,随着经济的复苏,维生素类饲料添加剂销售量大大增加,全球原料药大制造商帝斯曼最近也宣布对饲料维生素A涨价6%,所以饲料中维生素A的检测就显得非常紧急和重要。以下是维生素A的测定的详细检测方法。1  仪器与试剂1.1 检测仪器 

详细介绍

近期,随着经济的复苏,维生素类饲料添加剂销售量大大增加,全球原料药大制造商帝斯曼最近也宣布对饲料维生素A涨价6%,所以饲料中维生素A的检测就显得非常紧急和重要。

以下是维生素A的测定的详细检测方法。

1  仪器与试剂

1.1 检测仪器
LC-600高效液相色谱仪(南京科捷)
Vertex 色谱柱:150mm×4.6mm×5μm;
分析天平,感量为分别为0.1mg
圆底烧瓶,带回流冷凝器;
恒温水浴锅;
旋转蒸发器;
超纯水器。

1.2 试剂
无水乙醚:不含过氧化物;
无水乙醇;
正己烷,色谱纯;
异丙醇,色谱纯;
甲醇,色谱纯;
2,6-二叔丁基对甲酚(BHT);
无水硫酸钠;
氮气(纯度99%);
碘化钾溶液;
淀粉指示液;
硫代硫酸钠溶液;
氢氧化钾溶液;
L-抗坏血酸纯品;
酚酞指示剂;
1,4-二氧六环;
维生素A乙酸酯标准品:含量≥99%;
维生素A标准贮备液;
维生素A标准工作液。

2  试样溶液的制备

2.1 皂化
称取试样配合饲料或浓缩饲料适量,置入圆底烧瓶中,加L-坏血酸乙醇溶液,使试样完全分散、浸湿,加氢氧化钾溶液,混匀,置于水浴上回流,不时震荡防止试样粘附在瓶壁上,皂化结束,分别用无水乙醇、水自冷凝管顶端冲洗其内部,取出烧瓶冷却至40℃。

2.2 提取
定量转移全部皂化液于盛有无水乙醚的分液漏斗中,用蒸馏水分2次~3次冲洗圆底烧瓶并入分液漏斗,加盖、放气,随后混合,激烈震荡,静置、分层。转移水相于第二个分液漏斗中,分次用乙醚重复提取两次,弃去水相,合并三次乙醚相。用蒸馏水多次洗涤乙醚提取液至中性,初次水洗时轻轻旋摇,防止乳化。乙醚提取液通过无水硫酸钠脱水,转移到棕色容量瓶中,加BHT使之溶解,用乙醚定容至刻度。以上操作均在避光通风柜内进行。

2.3 浓缩
从乙醚提取液中分取一定体积置于旋转蒸发器烧瓶中,在水浴温度约50℃,部分真空条件下蒸发至干或用氮气吹干。残渣用甲醇溶解并稀释,离心或通过0.45μm过滤膜过滤,用于高效液相色谱仪分析。以上操作均在避光通风柜内进行。

3  色谱条件
色谱柱:Vertex 色谱柱 150mm×4.6mm×5μm;
流动相:甲醇+水=95+5;
流速:1.0mL/min;
温度:室温;
进样量:20μL;
检测波长:326nm。

4  维生素A标准高效液相色谱图

饲料中维生素A的液相(HPLC)检测方案 (图1)

仪器配置:

型号名称

配置

数量



液相色谱仪LC-600A

(智能全控)


UV600紫外检测器

1台

P600恒流泵(0.001~9.999ml/min)

1台

美国原装进口7725i进样阀(含支架)

1只

100ul进样针

1只

工具包(含管路托盘)

1只

液相色谱柱

250×4 .6,5um   C18进口

1根

分析天平

200g.1mg

1台

旋转蒸发器


1台

恒温水浴锅


1台

JL-120DTH超声波清洗器

加热 3L

1台

20L超纯水器


1台

KJ330色谱柱温箱

恒温误差±0.1℃

1台

溶剂过滤器

含真空泵

1套

滤膜

有机、水系过滤膜 2盒

有机、水系过滤器 2盒

1套

流动相储液瓶


2只

电脑、打印机


1套