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饲料中L-肉碱的高效液相色谱(HPLC)检测方案

饲料中L-肉碱的高效液相色谱(HPLC)检测方案

左旋肉碱(L-肉碱)又称肉毒碱,是一种水溶性氨基酸,由赖氨酸衍生而来。分子结构为L-γ-三甲胺β-羟丁酸,分子式为C7H16NO3,分子量为161.2。它是B族维生素类似物,曾被称为维生素BT。

详细介绍

左旋肉碱(L-肉碱)又称肉毒碱,是一种水溶性氨基酸,由赖氨酸衍生而来。分子结构为L-γ-三甲胺β-羟丁酸,分子式为C7H16NO3,分子量为161.2。它是B族维生素类似物,曾被称为维生素BT。其分子结构中含有一个可供脂肪酸脂化的羟基,其饱和键和极性官能团有良好的水溶性和吸湿性,200℃以上它仍稳定存在,可在PH3~6的溶液中放置一年以上而不变坏。1998年我国卫生部将L-肉碱批准为食品添加剂,列入营养强化剂类。

以下是饲料中L-肉碱的详细检测方法。

1  仪器与试剂

1.1 仪器 
LC-10Tvp高效液相色谱仪
Vertex 色谱柱 C18  250mm×4.6mm×5μm
实验室常用仪器设备
超声波水浴
分析天平(感量0.001g)
0.45μm水性滤膜

1.2 试剂 

异丙醇,色谱纯。

甲醇,色谱纯。

乙腈,色谱纯。

磷酸氢二钠。磷酸二氢钾。

三乙醇胺。

柠檬酸。

氧化银。

肉碱衍生剂。

2  测定原理
样品经加乙醇超声提取后,然后加入肉碱衍生剂,将衍生物注入高效液相色谱反相柱上进行分离,用紫外检测器在210nm波长处定量测定。

3  试样溶液的制备
称取5g试样于100ml烧杯中,加入30ml无水乙醇,溶解并转移至100ml容量瓶中,先后用10ml无水乙醇分3次洗涤烧杯,样液转移至100ml容量瓶中,超声提取10min后用无水乙醇定容至刻度,混匀后于4000r/min离心5min。取上清液2ml,加入肉碱衍生剂0.25ml(衍生剂配制方法:40 mg P-苯酰溴溶解于1.0 ml乙腈,加入40% 氢氧化四丁基铵50 µl),混合后置于60℃恒温水温箱120 min,吸取20 µl进样分析。

4  色谱条件

色谱柱:Vertex C18柱 250mm×4.6mm×5μm;

流动相:甲醇:磷酸盐=5:95

流速:1.0mL/min;

温度:室温;

进样量:20μL;

检测波长:210nm。

饲料中L-肉碱的高效液相色谱(HPLC)检测方案(图1)